孔雀石綠檢測試劑盒

產(chǎn)品型號：

所屬分類：獸藥殘留 ,激素類ELISA快速檢測試劑盒

產(chǎn)品時間：2024-08-18

簡要描述：孔雀石綠檢測試劑盒可檢樣本:水產(chǎn)（魚蝦）、水樣在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物孔雀石綠將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗孔雀石綠抗體，加入酶標記物后，用 TMB 底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物孔雀石綠的含量成負相關(guān)，與標準曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物孔雀石綠的含量。

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詳細說明：

獸藥殘留類（elisa試劑盒）

產(chǎn)品名稱	包裝規(guī)格	靈敏度	可檢樣本
笨乙醇胺A檢測試劑盒（新產(chǎn)品）	96孔	0.25ppb	肉、飼料、尿液
可樂啶快速檢測試劑盒（新產(chǎn)品）	96孔	0.05ppb	肉、飼料、尿液、血清
賽庚啶快速檢測試劑盒（新產(chǎn)品）	96孔	0.05ppb	肉、飼料、尿液、血清
呋喃唑酮代謝物（AOZ）快速檢測試劑盒	96孔	0.02 ppb	組織、蜂蜜、水產(chǎn)
呋喃它酮代謝物（AMOZ）快速檢測試劑盒	96孔	0.1 ppb	水產(chǎn)（魚蝦）、蜂蜜、雞肉、雞肝, 奶樣
呋喃妥因代謝物（AHD）快速檢測試劑盒	96孔	0.05 ppb	水產(chǎn)（魚蝦）、蜂蜜、雞肉、雞肝、奶樣
呋喃西林代謝物（SEM）快速檢測試劑盒	96孔	0.1 ppb	水產(chǎn)（魚蝦）、蜂蜜、雞肉、雞肝, 奶樣
新霉素（Neomycin）快速檢測試劑盒	96孔	0.5ppb	豬肉/肝、雞鴨肉/肝蝦魚、蜂蜜
四環(huán)素類（TC）快速檢測試劑盒	96孔	0.05 ppb	雞肉/鴨肉、豬肉/豬肝、水產(chǎn)、蜂蜜
氯霉素（CAP）快速檢測試劑盒	96孔	0.05 ppb	動物組織、水產(chǎn)、蜂蜜、腸衣、尿液、雞蛋、牛奶、血清
氟苯尼考（FF）快速檢測試劑盒	96孔	0.5 ppb	動物組織、水產(chǎn)、蜂蜜、腸衣、尿液、雞蛋、牛奶、血清
克倫特羅檢（CLE）快速測試劑盒	96孔	0.1ppb	豬肉、豬肝、血清飼料、豬尿
萊克多巴胺（RACT）檢測試劑盒	96孔	0.1/0.03ppb	尿液
沙丁胺醇（Salbutamal）快速檢測試劑盒	96孔	0.5 ppb	肉類、肝臟、尿液、配合料、濃縮料、預(yù)混料
β-興奮ji快速檢測試劑盒	96孔	0.1 ppb	尿樣、血清、組織、飼料
喹諾酮類藥物（QNS）快速檢測試劑盒	96孔	1 ppb	組織、蝦魚、血清、蜂蜜
恩諾沙星（EN）快速檢測試劑盒	96孔	0.25 ppb	組織、蝦魚、血清、蜂蜜
氨芐青霉素（AM）快速檢測試劑盒	96孔	0.1 ppb	豬肉/肝、雞鴨肉/肝蝦魚、蜂蜜、牛奶
青霉素G（BP）快速檢測試劑盒	96孔	0.05 ppb	豬肉/肝、雞鴨肉/肝蝦魚、蜂蜜、牛奶
泰樂菌素（TYL）快速檢測試劑盒	96孔	1.5 ppb	肌肉、肝臟、蜂蜜
鏈霉素（Str）快速檢測試劑盒	96孔	0.5 ppb	肌肉、水產(chǎn)、肝臟、蜂蜜、牛奶
鏈霉素（Str）快速檢測試劑盒	96孔	0.1 ppb	肌肉、水產(chǎn)、肝臟、蜂蜜、牛奶
喹乙醇（olaquindox）快速檢測試劑盒	96孔	1ppb	組織、飼料
安定（Dia）快速檢測試劑盒	96孔	0.1 ppb	豬肉/肝、雞肉/肝、飼料、尿液
己烯雌酚（DES）快速檢測試劑盒	96孔	0.1 ppb	雞肉、雞肝、飼料、尿液、水產(chǎn)（魚蝦）
慶大霉素（Gen）快速檢測試劑盒	96孔	0.1 ppb	雞肉、雞肝、血清
三聚氰胺（Melamine）快速檢測試劑盒	96孔	1ppb	牛奶、組織、蛋類、飼料
孔雀石綠檢測試劑盒	96孔	0.025 ppb	水產(chǎn)（魚蝦）、水樣
磺胺多殘留快速檢測試劑盒	96孔	0.4 ppb	雞肉/肝、豬肉/肝、蜂蜜、雞蛋、血清、尿液、牛奶
磺胺二甲基嘧啶（SM2）快速檢測試劑盒	96孔	1 ppb	雞肉/肝、豬肉/肝、蜂蜜、雞蛋、血清、尿液、牛奶
磺胺對甲氧嘧啶（SMD）快速檢測試劑盒	96孔	0.4 ppb	雞肉/肝、豬肉/肝、蜂蜜、雞蛋、血清、尿液、牛奶
磺胺甲噁唑（SMZ）快速檢測試劑盒	96孔	0.4 ppb	雞肉/肝、豬肉/肝、蜂蜜、雞蛋、血清、尿液、牛奶
磺胺類三殘留快速檢測試劑盒	96孔	1 ppb	雞肉/肝、豬肉/肝、蜂蜜、雞蛋、血清、尿液、牛奶
磺胺喹噁啉（SQX）快速檢測試劑盒	96孔	1 ppb	雞肉/肝、豬肉/肝、蜂蜜、雞蛋、血清、尿液、牛奶

EF02103 2014-01 版

孔雀石綠快速檢測試劑盒說明書

一、原理

本試劑盒采用間接競爭 ELISA 方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物孔雀石綠將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗孔雀石綠抗體，加入酶標記物后，用 TMB 底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物孔雀石綠的含量成負相關(guān)，與標準曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物孔雀石綠的含量。

二、試劑盒特性

試劑盒靈敏度： 0.05ppb

孵育溫度： 25℃

孵育時間： 30min～30min～15min

樣本檢測限

水樣 —————— 0.1ppb

水產(chǎn)品 —————— 0.5ppb

交叉反應(yīng)率

顯性孔雀石綠 ————————		100%
隱性孔雀石綠 ————————		0.1%
結(jié) 晶紫	——————————	95%
隱性結(jié)晶紫	——————————	0.1%

樣本回收率

水樣、水產(chǎn)品 ———————— 80%~110%

精密度

板內(nèi)、板間變異系數(shù)≤12%

三、試劑盒組成

1	微量測試孔	每條 8 孔，一板 12 條

	10 倍濃縮標準液	0ppb	0.5ppb
	×6 瓶
2	×6 瓶	1.5ppb	4.5ppb

	（1ml/瓶、黑色帽） _13.5ppb		40.5ppb
3	酶標記物	12ml	紅色帽

4	抗體工作液	7ml	藍色帽

5	底物 A 液	7ml	白色帽

6	底物 B 液	7ml	黑色帽

7	終止液	7ml	黃色帽

8	20X 濃縮洗滌液	40ml	白色帽

9	氧化劑	3ml	黑色帽

10	4X 濃縮復(fù)溶液	50ml	透明帽

四、所用儀器、試劑

具備的儀器：酶標儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量 0.01g）、氮吹儀、恒溫箱

微量移液器：單道 20～200µl、單道 100～1000µl、

多道 30～300 µl

試劑：乙腈、二氯甲烷、無水硫酸鈉、正己烷

五、樣本前處理步驟

樣本處理前須知

（a）實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。

（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結(jié)果。

樣本前處理需配制： 配液 1 樣品提取液

乙腈-二氯甲烷混合溶液：

V _乙腈-V _二氯甲烷 = 4 : 1，取 40ml 乙腈，再加入 10ml 二氯甲烷，混勻后使用。

配液 2 樣品復(fù)溶液

將 4X 濃縮復(fù)溶液用去離子水按 1：3 稀釋（1 份 4×濃縮復(fù)溶液+3 份去離子水），或按所需用量配制。

樣本處理：

（a）水樣處理方法

取 50µl 清澈水樣樣直接測定（如果水樣渾濁一定要過濾或 4000r/min 離心 10min，直至得到清澈樣），暫不使用的樣本應(yīng)冷凍保存。

樣本稀釋倍數(shù): 1 倍

（b）水產(chǎn)品處理方法

1、稱取 2±0.05g 均質(zhì)組織樣品于 50ml 離心管中，加入 6ml 樣品提取液（配液 1），2g 無水硫酸鈉，振蕩 5min ，室溫（25℃左右）4000r/min以上離心 10min；

2、取 3ml 上清液，加入 20µl 氧化劑，搖勻，在 56℃ 條件下氮氣或空氣流吹至*干燥；

3、加入 1ml 正己烷，加入 1ml 樣品復(fù)溶液（配液

2），振蕩搖勻 1min，4000r/min 以上離心 5min；

4、取下層 50 µl 用于分析；

樣本稀釋倍數(shù): 1 倍

注：此方法所得到的結(jié)果為孔雀石綠；隱性孔雀石綠；結(jié)晶紫；隱性結(jié)晶紫的總量。

六、酶標免疫分析程序:

測定前應(yīng)須知：

1、使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫（20～25℃）。

2、使用之后立即將所有試劑放回 2～8℃。

3、在 ELISA 分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的*性，正確的洗板操作是 ELISA 測定程序中的要點。

4、所有恒溫孵育過程，避免光線照射，用蓋板膜蓋住微孔板。

操作步驟：

1、從 2～8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑，室溫（20～ 25℃）平衡 30min 以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2、取出框架及需要數(shù)量的微孔，將不用的微孔放入自封袋，保存于 2-8℃。

3、配液 1：將 40ml 濃縮洗滌液（20 倍濃縮）用去離子水按照 1：19 稀釋（1 份濃縮洗滌液+19 份去離子水），或按所需用量配制洗滌液。

配液 2：

配制孔雀石綠標準液：取一定量的 10 倍濃縮

標準液用樣品復(fù)溶液 10 倍稀釋，現(xiàn)配現(xiàn)用，具體如下：

標準液6：配制4.05ppb 標準液--取50ul 40.5ppb

標準液加 450ul 樣品復(fù)溶液混勻；

標準液5：配制1.35ppb 標準液--取50ul 13.5ppb

標準液加 450ul 樣品復(fù)溶液混勻；

標準液 4：配制 0.45ppb 標準液--取 50ul 4.5ppb

標準液加 450ul 樣品復(fù)溶液混勻；

標準液 3：配制 0.15ppb 標準液--取 50ul 1.5ppb

標準液加 450ul 樣品復(fù)溶液混勻；

標準液 2：配制 0.05ppb 標準液--取 50ul 0.5ppb

標準液加 450ul 樣品復(fù)溶液混勻；

標準液 1：配制 0ppb 標準液--取 50ul 0ppb 標

準液加 450ul 樣品復(fù)溶液混勻；

4、編號：將樣本和標準品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣本和標準品做 2 孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。

5、加標準品/樣本 50µl/孔到各自的微孔中，然后加入抗體工作液 50µl/孔，用蓋板膜封板，輕輕振蕩混勻。25℃環(huán)境中反應(yīng) 30min。

6、將孔內(nèi)液體甩干，用已稀釋的洗滌液 250µl/孔洗板 4～5 次，每次間隔 15～30 秒，用吸水紙拍干（拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。

7、每孔加入酶標記物 100µl，蓋板膜蓋板后置25℃ 環(huán)境中反應(yīng) 30min。將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌液充分洗，4～5 遍（同上），用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。

8、顯色：加入底物 A 液 50µl/孔，再加入底物 B 液 50µl/孔，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光顯色 15min。

9、測定：加入終止液 50µl/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè) 定酶標儀于 450nm 處（建議用雙波長 450/630n m 檢測，5min 內(nèi)讀數(shù)），測定每孔 OD 值。

七、結(jié)果判定

結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第 1 種方法，定量判定用第 2 種方法。注意樣本吸光度值與其所含孔雀石綠量成負相關(guān)。

1、粗略判定：

用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本 1 的吸光度值為 0.3，樣本 2 的吸光度值為 1.0，標準液吸光度值分別是：

0ppb 為 2.243；0.05ppb 為 1.816；0.15ppb 為 1.415；變質(zhì)。

0.45ppb 為 0.74；1.35ppb 為 0.313；4.05ppb 為 0.155。 8、該試劑盒zui佳反應(yīng)溫度為 25℃，溫度過高或過

則樣本 1 的濃度范圍是 1.35ppb～4.05ppb；樣本 2

的濃度范圍是 0.15ppb～0.45ppb，乘以其對應(yīng)的稀 釋倍數(shù)即為樣本中孔雀石綠實際濃度。

2、定量分析

（1）百分吸光率的計算，標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值（雙孔）除以*個標準（0 標準）的吸光度值，再乘以 100%，即

百分吸光率（%）＝ ×100% B₀

低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

九、儲藏條件和保質(zhì)期

1、儲藏條件：試劑盒于 2-8℃保存，不要冷凍。 2、保質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為 1 年，生產(chǎn)日期見

包裝盒。

提示：酶標板真空包裝袋若有漏氣，酶標板仍然正常有效，不影響實驗結(jié)果，請放心使用。

B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值 B₀—0ng/ml 標準溶液的平均吸光度值

（2）標準曲線的繪制與計算以標準品百分吸光率為縱坐標，以孔雀石綠標準品濃度（ng/ml）的半對數(shù)為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀 釋倍數(shù)即為樣本中孔雀石綠實際濃度。若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準確、快速分析。

八、注意事項

1、室溫低于 25℃或試劑及標本未回到室溫（20～25℃）會導(dǎo)致所有標準的 OD 值偏低。

2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會伴隨著標準曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進行下一步操作。

3、混合要均勻，否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。

4、反應(yīng)終止液為 2M 硫酸，避免接觸皮膚。

5、不要使用過了有效日期的試劑盒；稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD 值變化；不要交換使用不同批號的盒中試劑。

6、不用的微孔板放進自封袋重新密封；標準物質(zhì) 和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。

7、顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當棄之。標準品 1 的吸光度值小于 0.5 時，表示試劑可能